昆虫elisa检测试剂盒是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。
1、标准品的稀释：（本试剂系统提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）按下表格执行：
120ng/ml：（5号标准品）：120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液
60ng/ml：（4号标准品）：120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液
30ng/ml：（3号标准品）：120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液
15ng/ml：（2号标准品）：120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液
7.5ng/ml：（1号标准品）：120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液
2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3、 加样：
a、空白孔：（空白对照孔不加样品，生物素标记的抗保幼激素(JH)抗体，链霉亲和素-HRP，其余各步操作相同 ；
b、标准品孔：加入标准品50μl，链霉亲和素-HRP50μl（标准品中已事先整合好生物素标记抗体，故在操作时不加，只加链霉素-HRP）；
c、样本反应孔：加入样本40μl，然后各加入抗保幼激素(JH)抗体10μl、链霉亲和素-HRP（空白孔除外）50μl。盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育60分钟。
4、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释备用。
5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6、显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
7、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
结果判断：
1、每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值。
2、根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种熟悉应用软件来计算。
3、手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。推荐使用专业制作曲线软件进行分析计算结果。
4、若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
在线客服
电话咨询
